通过PCR扩增的W11的pflB-pflA基因启动子区（PpflB）被克隆到XbaI-SalI消化的pAM401中，以产生pAM-PpflB。使用KOD-FX，以总DNA作为模板，通过PCR扩增缺乏翻译起始密码子的五乳杆菌NBRC 106467T L-乳酸酯脱水酶基因（ldhL1LP）；用XhoI消化；并克隆到SalI-NruI消化的pAM-PpflB中，产生pPFL-ldhL1LP。使用电穿孔法将plas-mid插入粪肠球菌菌株中。
参考文献：Doi Y. L-lactate production from biodiesel-derived crude glycerol by metabolically engineered Enterococcus faecalis: cytotoxic evaluation of biodiesel waste and development of a glycerol-inducible gene expression system. Appl Environ Microbiol. 2015 Mar;81(6):2082-9.
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通过PCR扩增的W11的pflB-pflA基因启动子区（PpflB）被克隆到XbaI-SalI消化的pAM401中，以产生pAM-PpflB。使用KOD-FX，以总DNA作为模板，通过PCR扩增缺乏翻译起始密码子的五乳杆菌NBRC 106467T L-乳酸酯脱水酶基因（ldhL1LP）；用XhoI消化；并克隆到SalI-NruI消化的pAM-PpflB中，产生pPFL-ldhL1LP。使用电穿孔法将plas-mid插入粪肠球菌菌株中。
参考文献：Doi Y. L-lactate production from biodiesel-derived crude glycerol by metabolically engineered Enterococcus faecalis: cytotoxic evaluation of biodiesel waste and development of a glycerol-inducible gene expression system. Appl Environ Microbiol. 2015 Mar;81(6):2082-9.
