将含有pct基因的NheI-SpeI片段插入pduP序列下游的相应限制性位点（pBHA-pduP）。pBHA-pduP-pct-yahK是通过将含有pct（pBHA-pct）和yahK（pBHA-yahK）的NheI-SpeI片段顺序插入pBHA-pdulP的SpeI位点而产生的。pGEM-Placz-pduP-pct-yahK是通过将NheI-SpeI片段（含有来自pBHA-pduP-pct-yahK的pduP-put-yahK）插入pGEM-PracZ的SpeI位点而获得的。最后，用ScaI切割pBR322，用碱性磷酸酶处理，与用NotI消化pGEM-PlacZ-pduP-pct-yahK获得的DNA片段连接，然后用Klenow片段处理，得到质粒pBR-1,2PDO（pduP-pc-yahK）。
参考文献：Jo MH, Ju JH, Heo SY, Cho J, Jeong KJ, Kim MS, Kim CH, Oh BR. Production of 1,2-propanediol from glycerol in Klebsiella pneumoniae GEM167 with flux enhancement of the oxidative pathway. Biotechnol Biofuels Bioprod. 2023 Feb 6;16(1):18.
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将含有pct基因的NheI-SpeI片段插入pduP序列下游的相应限制性位点（pBHA-pduP）。pBHA-pduP-pct-yahK是通过将含有pct（pBHA-pct）和yahK（pBHA-yahK）的NheI-SpeI片段顺序插入pBHA-pdulP的SpeI位点而产生的。pGEM-Placz-pduP-pct-yahK是通过将NheI-SpeI片段（含有来自pBHA-pduP-pct-yahK的pduP-put-yahK）插入pGEM-PracZ的SpeI位点而获得的。最后，用ScaI切割pBR322，用碱性磷酸酶处理，与用NotI消化pGEM-PlacZ-pduP-pct-yahK获得的DNA片段连接，然后用Klenow片段处理，得到质粒pBR-1,2PDO（pduP-pc-yahK）。
参考文献：Jo MH, Ju JH, Heo SY, Cho J, Jeong KJ, Kim MS, Kim CH, Oh BR. Production of 1,2-propanediol from glycerol in Klebsiella pneumoniae GEM167 with flux enhancement of the oxidative pathway. Biotechnol Biofuels Bioprod. 2023 Feb 6;16(1):18.
