肺炎克雷伯菌LDH526是肺炎克雷克菌HR526的突变株，缺失了ldhA基因。为了构建大肠杆菌BL21（DE3）中酶过表达的质粒，通过PCR从基因组DNA中扩增出编码甘油脱水酶（gldABC）或二醇脱水酶（pduCDE）的基因。所有正向引物都包含一个重叠的25nt序列，在5'末端与pET28a重叠。同样，所有反向引物也包含一个重叠的25nt序列，pET28a位于5'末端。通过Gibson组装将扩增的PCR片段插入用EcoRI和HindIII消化的质粒pET28a（Novagen）中。为了构建肺炎克雷伯菌中酶过表达的质粒，通过PCR从基因组DNA中扩增出编码二醇脱水酶及其激活剂（pduCDEGH）的基因。正向引物包含一个重叠的20 nt序列，pHSG298位于5'末端。反向引物还包含一个重叠的20 nt序列，在5'端为pHSG298。扩增的PCR片段通过Gibson组装插入用EcoRI和XbaI消化的质粒pHSG298（TAKARA）中。
参考文献：Chen Z, Sun H, Huang J, Wu Y, Liu D. Metabolic Engineering of Klebsiella pneumoniae for the Production of 2-Butanone from Glucose. PLoS One. 2015 Oct 14;10(10):e0140508.
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肺炎克雷伯菌LDH526是肺炎克雷克菌HR526的突变株，缺失了ldhA基因。为了构建大肠杆菌BL21（DE3）中酶过表达的质粒，通过PCR从基因组DNA中扩增出编码甘油脱水酶（gldABC）或二醇脱水酶（pduCDE）的基因。所有正向引物都包含一个重叠的25nt序列，在5'末端与pET28a重叠。同样，所有反向引物也包含一个重叠的25nt序列，pET28a位于5'末端。通过Gibson组装将扩增的PCR片段插入用EcoRI和HindIII消化的质粒pET28a（Novagen）中。为了构建肺炎克雷伯菌中酶过表达的质粒，通过PCR从基因组DNA中扩增出编码二醇脱水酶及其激活剂（pduCDEGH）的基因。正向引物包含一个重叠的20 nt序列，pHSG298位于5'末端。反向引物还包含一个重叠的20 nt序列，在5'端为pHSG298。扩增的PCR片段通过Gibson组装插入用EcoRI和XbaI消化的质粒pHSG298（TAKARA）中。
参考文献：Chen Z, Sun H, Huang J, Wu Y, Liu D. Metabolic Engineering of Klebsiella pneumoniae for the Production of 2-Butanone from Glucose. PLoS One. 2015 Oct 14;10(10):e0140508.
