为了构建质粒pSKSM-YdhE-GalU1-Pgm（pSKSM-YGP），以Promega DNA提取试剂盒提取的谷氨酸棒杆菌基因组DNA为模板，用引物对编码UDP葡萄糖焦磷酸化酶和磷酸葡萄糖变位酶的GalU1和Pgm进行PCR扩增。将产生的PCR产物在琼脂糖凝胶（0.6%）中进行验证和电泳分离，纯化，并分别在XbaI/NotI和NotI/PstI限制性位点连接到线性化的pSKSM-Y（用于克隆galU1）和pSKSM-YG（用于克隆pgm）中。将质粒电穿孔转入谷氨酸棒状杆菌中，通过限制性酶切和基因测序验证阳性菌落。
参考文献：Amoah OJ, Thapa SB, Ma SY, Nguyen HT, Zakaria MM, Sohng JK. Biosynthesis of Apigenin Glucosides in Engineered Corynebacterium glutamicum. J Microbiol Biotechnol. 2024 May 28;34(5):1154-1163.
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为了构建质粒pSKSM-YdhE-GalU1-Pgm（pSKSM-YGP），以Promega DNA提取试剂盒提取的谷氨酸棒杆菌基因组DNA为模板，用引物对编码UDP葡萄糖焦磷酸化酶和磷酸葡萄糖变位酶的GalU1和Pgm进行PCR扩增。将产生的PCR产物在琼脂糖凝胶（0.6%）中进行验证和电泳分离，纯化，并分别在XbaI/NotI和NotI/PstI限制性位点连接到线性化的pSKSM-Y（用于克隆galU1）和pSKSM-YG（用于克隆pgm）中。将质粒电穿孔转入谷氨酸棒状杆菌中，通过限制性酶切和基因测序验证阳性菌落。
参考文献：Amoah OJ, Thapa SB, Ma SY, Nguyen HT, Zakaria MM, Sohng JK. Biosynthesis of Apigenin Glucosides in Engineered Corynebacterium glutamicum. J Microbiol Biotechnol. 2024 May 28;34(5):1154-1163.
