选择来自蓝藻杆菌（ShCAST）中的CAST系统进行高通量细菌基因组工程，CAST系统由tn7样转座酶亚基和亚型V-K CRISPR-Cas蛋白Cas12k组成。合成了天然的TnsB-TnsC-TniQ操纵子和Cas12k基因。通过Gibson组装将两个片段组装成pCasPA质粒的主干，得到pCASTPA质粒。通过证明ShCAST应用于铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌位点特异性转位的可行性和有效性，突出了其广泛的宿主范围活性。通过包括两个选择系统（sacB和庆大霉素），高效地富集了所需的转座子突变体，使构建高通量转座子突变体库成为可能。由于其广泛的宿主范围活性，该方法可以广泛应用于不同的微生物物种，以构建位点特异性基因组规模或聚焦文库，能够快速分析微生物菌株的基因功能和工程。
参考文献：Chen W, Ren ZH, Tang N, Chai G, Zhang H, Zhang Y, Ma J, Wu Z, Shen X, Huang X, Luo GZ, Ji Q. Targeted genetic screening in bacteria with a Cas12k-guided transposase. Cell Rep. 2021 Aug 31;36(9):109635.
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选择来自蓝藻杆菌（ShCAST）中的CAST系统进行高通量细菌基因组工程，CAST系统由tn7样转座酶亚基和亚型V-K CRISPR-Cas蛋白Cas12k组成。合成了天然的TnsB-TnsC-TniQ操纵子和Cas12k基因。通过Gibson组装将两个片段组装成pCasPA质粒的主干，得到pCASTPA质粒。通过证明ShCAST应用于铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌位点特异性转位的可行性和有效性，突出了其广泛的宿主范围活性。通过包括两个选择系统（sacB和庆大霉素），高效地富集了所需的转座子突变体，使构建高通量转座子突变体库成为可能。由于其广泛的宿主范围活性，该方法可以广泛应用于不同的微生物物种，以构建位点特异性基因组规模或聚焦文库，能够快速分析微生物菌株的基因功能和工程。
参考文献：Chen W, Ren ZH, Tang N, Chai G, Zhang H, Zhang Y, Ma J, Wu Z, Shen X, Huang X, Luo GZ, Ji Q. Targeted genetic screening in bacteria with a Cas12k-guided transposase. Cell Rep. 2021 Aug 31;36(9):109635.
