有可能,即使是重组酶缺失的菌株也存在同源重组的情况,我们在实验中就成功地使用DH5a进行同源重组,
我也发现用DH5a会发生重组,虽然概率比较低。
我现在构建的一个质粒里面有三对重复序列,长度分别约300bp, 500bp, 1kb. 鉴定连接产物时,用菌液pcr看两个接口是否正确,菌液摇几个小时还是清澈的,不过pcr能出来,而且有很多阳性克隆。摇过夜能看到细菌,但我怀疑长出来的是杂菌,因为质粒抽不出来。
现在这个载体都构建半年多了,一直是这个问题,菌液pcr鉴定正确,就是提不出质粒,请高手指点下是怎么回事。我是怀疑把氨苄抗性基因的启动子破坏了,或者是复制子重组掉了
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