构建了PGAP-Cpf1质粒，用Cpf1/ S和Cpf1/A引物从质粒中扩增出密码子优化的FnCpf1片段，设计FnCpf1并与核定位序列（NLS）融合，使真核细胞进入细胞核。利用PGAPHKA-S/PGAPHKA-A引物从PGAPHKA中扩增出含有GAP启动子、卡那霉素抗性表达盒和大肠杆菌复制序列的来源（片段2）。然后使用Gibson组装方法组合两个片段。PTEF-Cpf1质粒的构建方法与上述方法相似。
参考文献：Zhang X, Gu S, Zheng X, Peng S, Li Y, Lin Y, Liang S. A Novel and Efficient Genome Editing Tool Assisted by CRISPR-Cas12a/Cpf1 for Pichia pastoris. ACS Synth Biol. 2021 Nov 19;10(11):2927-2937.
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构建了PGAP-Cpf1质粒，用Cpf1/ S和Cpf1/A引物从质粒中扩增出密码子优化的FnCpf1片段，设计FnCpf1并与核定位序列（NLS）融合，使真核细胞进入细胞核。利用PGAPHKA-S/PGAPHKA-A引物从PGAPHKA中扩增出含有GAP启动子、卡那霉素抗性表达盒和大肠杆菌复制序列的来源（片段2）。然后使用Gibson组装方法组合两个片段。PTEF-Cpf1质粒的构建方法与上述方法相似。
参考文献：Zhang X, Gu S, Zheng X, Peng S, Li Y, Lin Y, Liang S. A Novel and Efficient Genome Editing Tool Assisted by CRISPR-Cas12a/Cpf1 for Pichia pastoris. ACS Synth Biol. 2021 Nov 19;10(11):2927-2937.
