首先构建一个衍生质粒pLP10。pLP10由一个包含R6K复制起源、一个RP4转移起源和一个来自pSW23T的氯霉素抗性基因（cat）的片段，以及一个包含一个致命的反选择基因ccdB和一个来自pSW25T-ccdB的PTAC启动子系统的片段组成。将pLP10中的ccdB基因替换为vmi480，生成质粒pLP11，然后将pLP11中的PTAC启动子系统替换为PBAD启动子系统，生成新的质粒pLP12。通过AhdI消化后的pLP11和pLP12扩增得到自杀性t载体pLP11-T和pLP12-T，导致每个t载体两端都有单碱基3-T悬垂。
参考文献：Luo P, He X, Liu Q, Hu C (2015) Developing Universal Genetic Tools for Rapid and Efficient Deletion Mutation in Vibrio Species Based on Suicide T-Vectors Carrying a Novel Counterselectable Marker, vmi480. PLOS ONE 10(12)
技术服务 Technology Services
联系我们
CONTACT US
-
0574-87917803
服务热线 -
testobio@163.com
邮箱
首先构建一个衍生质粒pLP10。pLP10由一个包含R6K复制起源、一个RP4转移起源和一个来自pSW23T的氯霉素抗性基因（cat）的片段，以及一个包含一个致命的反选择基因ccdB和一个来自pSW25T-ccdB的PTAC启动子系统的片段组成。将pLP10中的ccdB基因替换为vmi480，生成质粒pLP11，然后将pLP11中的PTAC启动子系统替换为PBAD启动子系统，生成新的质粒pLP12。通过AhdI消化后的pLP11和pLP12扩增得到自杀性t载体pLP11-T和pLP12-T，导致每个t载体两端都有单碱基3-T悬垂。
参考文献：Luo P, He X, Liu Q, Hu C (2015) Developing Universal Genetic Tools for Rapid and Efficient Deletion Mutation in Vibrio Species Based on Suicide T-Vectors Carrying a Novel Counterselectable Marker, vmi480. PLOS ONE 10(12)
