干扰稳转细胞
干扰稳转细胞
干扰稳转细胞，是通过基因工程手段（如 shRNA、siRNA 表达载体）让细胞长期、稳定地 “沉默” 特定目标基因表达的细胞株（干扰元件整合到细胞基因组），核心用于研究基因的功能缺失表型。
核心特点：
- 沉默稳定：干扰元件持续发挥作用，避免瞬时干扰效果短暂、反复操作的问题
- 表型可靠：单克隆筛选后，细胞群体的基因沉默效率一致，能稳定呈现基因敲低后的功能变化(如增殖抑制、信号通路阻断)
- 适用场景：研究基因的必需功能（如敲低某抑癌基因看肿瘤细胞转移）、筛选基因相关药物靶点等
泰斯拓技术优势
多种骨架载体选择
高效的单克隆分选技术
多种转染或感染方式
严格的质控体系
干扰稳转细胞服务类型
| 服务大类 | 具体技术类型 | 构建方式/调控方式 | 交付内容 | 项目周期 |
|---|---|---|---|---|
| 过表达细胞系 | 组成型/诱导型过表达 | 慢病毒法、PB法 | 稳转cell pool(2管,10⁶细胞/管) 单克隆细胞系(2管,10⁶细胞/管) 对照cell pool(2管,10⁶细胞/管) 实验报告(流程、载体、鉴定结果等) |
Cell Pool: 8周 单克隆细胞系: 12周起 |
| 干扰细胞系 | shRNA干扰 | 慢病毒法(组成型/诱导型) | 同过表达交付内容 | 同过表达周期 |
| 干扰细胞系 | CRISPRi干扰 | 基于dCas9的转录抑制 | 同过表达交付内容 | 同过表达周期 |
实验流程与周期示意图
基因致死性/同源性分析
人工智能系统设计方案
RNP合成
优化的α-Donor
质粒构建
病毒包装
高效的电转系统
病毒转导系统
PB转座子系统
多克隆分析技术
优化的单克隆制备工艺
单克隆分析技术
Sanger测序
qPCR/WB/FC/IF等
功能检测：生长曲线、细胞周期、增殖和凋亡等
FAQs
1.什么是基因干扰？
基因干扰（Gene Interference） 是一类通过特定分子（如 RNA、蛋白质复合物）调控基因表达的机制，核心是在转录或转录后水平抑制目标基因的表达（使基因 “沉默”），不改变基因组 DNA 序列，仅阻断基因向蛋白质的转化过程，最终导致目标蛋白产量下降或功能丧失。
2.稳定转染与瞬时转染的区别？
| 对比维度 | 稳定转染 | 瞬间转染 |
|---|---|---|
| 基因整合状态 | 外源基因整合到细胞基因组 | 外源基因游离于细胞质，不整合进基因组 |
| 表达时效 | 长期稳定表达(传代后不丢失) | 短期表达(通常持续2-7天，随细胞分裂逐渐降解) |
| 筛选过程 | 需加抗生素等筛选压力，筛选阳性克隆 | 无需筛选，转染后直接检测表达 |
| 操作周期 | 长（数周，含筛选、单克隆化） | 短（1-3 天即可获得表达产物） |
| 适用场景 | 稳转细胞株构建、长期功能研究、蛋白量产 | 短期基因功能验证、小量蛋白制备、高通量筛选 |
| 细胞要求 | 需分裂活跃的细胞，便于基因整合 | 对细胞增殖能力要求低，适用于多数细胞 |
3.siRNA、shRNA和CRISPR干扰（CRISPRi）有什么区别？
| 技术类型 | 作用原理 | 沉默时效 | 编辑类型 | 适用场景 |
|---|---|---|---|---|
| siRNA | 化学合成的短双链 RNA，直接与 RISC 复合物结合，降解靶 mRNA | 瞬时（3-7 天） | 转录后水平沉默（不改变基因组） | 快速验证基因功能、短期干扰实验 |
| shRNA | 构建含短发夹 RNA 的表达载体，转染后转录为 shRNA，经加工为 siRNA 发挥作用 | 稳定（可整合至基因组，长期沉默） | 转录后水平沉默（不改变基因组） | 构建干扰稳转细胞株、长期功能研究 |
| CRISPRi | 用失活的 Cas9（dCas9）结合 sgRNA 靶向基因启动子，阻断 RNA 聚合酶结合 | 稳定（dCas9/sgRNA 可整合至基因组） | 转录水平沉默（不改变基因组） | 精准沉默特定基因、多基因同时干扰、长链非编码 RNA 研究 |
