二氧化碳嗜纤维菌为兼性厌氧菌或微需氧菌，二氧化碳嗜纤维菌属的细菌对营养和孵育的条件要求较高，在含5%绵羊血（或兔血）的琼脂或巧克力琼脂平板上，提供5%～10%的CO2或厌氧环境，35～37℃最适合该菌生长。经24小时孵育后，形成的菌落较小，孵育2～4天菌落直径可达2～4mm，菌落隆起、表面平坦、边缘不规则，光滑到粗糙，可扩散生长。能观察到琼脂的凹陷，尤其厌氧培养时，甚至肉眼看不见菌落，只观察到琼脂的凹陷，转到CO2环境继续培养即可恢复典型的菌落形态。在血平板上菌落通常为黄色、粉色和灰白色，刮取菌落观察通常是微黄色，有的菌落呈现金属光泽。溶血二氧化碳嗜纤维菌可有弱的溶血性，传代后可消失。黄褐二氧化碳嗜纤维菌的菌落有苦杏仁的味道。
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