使用两个大肠杆菌与希瓦氏菌穿梭质粒pETS与pSB1C3-repB，其在placI启动子驱动下具表达能力。用单克隆法将编码偶氮还原酶的azoRI基因重组到质粒载体中，质粒在外源基因插入位点的上游，均已引入了启动子placI。使用自杀质粒pDS3.0用于敲除MR-1的基因mtrA。目标基因mtrA的上游Ｎ端片段和下游Ｃ端片段可通过融合ＰＣＲ结合，即mtrA-NC。再运用酶切连接方法将其插入pDS3.0上SacI与SmaI酶切位点之间形成敲除载体pDS3.0-mtrA。
参考文献：[1]苏畅.奥纳达希瓦氏菌重组表达偶氮还原酶及mtrA基因敲除研究[D].厦门大学,2017.
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奥纳达希瓦氏菌重组表达偶氮还原酶及mtrA基因敲除
使用两个大肠杆菌与希瓦氏菌穿梭质粒pETS与pSB1C3-repB，其在placI启动子驱动下具表达能力。用单克隆法将编码偶氮还原酶的azoRI基因重组到质粒载体中，质粒在外源基因插入位点的上游，均已引入了启动子placI。使用自杀质粒pDS3.0用于敲除MR-1的基因mtrA。目标基因mtrA的上游Ｎ端片段和下游Ｃ端片段可通过融合ＰＣＲ结合，即mtrA-NC。再运用酶切连接方法将其插入pDS3.0上SacI与SmaI酶切位点之间形成敲除载体pDS3.0-mtrA。
参考文献：[1]苏畅.奥纳达希瓦氏菌重组表达偶氮还原酶及mtrA基因敲除研究[D].厦门大学,2017.
