以质粒pLL25为模板,PCR扩增获得上下游同源臂HA-1、HA-2;以pIB184-eGFP为模板,扩增获得插入片段P23-eGFP。割胶回收上下游同源臂HA-1、HA-2及插入片段P23-eGFP,overlap获得片段HA-1+P23+eGFP+HA-2,割胶回收。ApaI和XbaI双酶切质粒pLL25骨架,割胶回收获得线性化载体。将线性化载体骨架与目的片段HA-1+P23+eGFP+HA-2无缝克隆连接,构建获得重组质粒pYSH。
参考文献：[1]宋馨,王慧,袁世豪,等.基于CRISPR/Cas9系统对乳酸乳球菌进行绿色荧光蛋白标记[J].食品与发酵工业, 2022,48(2):163-167.
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基于CRISPR/Cas9系统对乳酸乳球菌进行绿色荧光蛋白标记
以质粒pLL25为模板,PCR扩增获得上下游同源臂HA-1、HA-2;以pIB184-eGFP为模板,扩增获得插入片段P23-eGFP。割胶回收上下游同源臂HA-1、HA-2及插入片段P23-eGFP,overlap获得片段HA-1+P23+eGFP+HA-2,割胶回收。ApaI和XbaI双酶切质粒pLL25骨架,割胶回收获得线性化载体。将线性化载体骨架与目的片段HA-1+P23+eGFP+HA-2无缝克隆连接,构建获得重组质粒pYSH。
参考文献：[1]宋馨,王慧,袁世豪,等.基于CRISPR/Cas9系统对乳酸乳球菌进行绿色荧光蛋白标记[J].食品与发酵工业, 2022,48(2):163-167.
