电转率不高,但是也算转进去了。
感受态制备:
1、将菌液(100mL)培养至OD600=0.25左右,冰浴30分钟
2、5000rpm离心10min,弃上清
3、用等体积0.5M蔗糖溶液重悬沉淀,冰浴5min,4℃,5000rpm离心10min,弃上清
4、用1/2体积0.5M蔗糖溶液重悬沉淀,冰浴5min,4℃,5000rpm离心10min,弃上清
5、用1/5体积0.5M蔗糖溶液重悬沉淀,冰浴5min,4℃,5000rpm离心10min,弃上清
6、用1/50体积0.5M蔗糖溶液重悬沉淀,冰浴5min,4℃,5000rpm离心10min,弃上清
7、用适量(500ul)0.5M蔗糖溶液重悬沉淀,分装为50ul一管,-80℃冰箱储存。
电转
50ul感受态金葡+3/5/7ul质粒电转化,条件用的是伯乐电转仪自带的金葡电转程序(2900V,100欧,25uF)
电转结果质粒浓度高的,长出来的单菌落会多一些。
3条评论
比猴还傻;
但是金葡不是有细胞壁吗,应该不容易裂解呀。我之前用甘油做的感受态都击穿了,一加上蔗糖就好,也不知道到底咋回事
2022-11-10 01:33:04;
好想做条狗;
为了维持渗透压防止菌体裂解,还有就是调节溶液密度便于离心收集。
2022-11-01 08:05:08;
比猴还傻;
为什么不用甘油用蔗糖呢
2022-11-01 03:22:25;
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