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2022-06-13 08:07:23       丑的别致

1DH5a菌株

DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型:F-φ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169deoRrecA1endA1hsdR17(rk-mk+)phoAsupE44λ-thi-1gyrA96relA1

2BL21(DE3)菌株

该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型:F-ompThsdSrBB-mB-),galdcmDE3

3BL21(DE3)pLysS菌株

该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:F-ompThsdSrBB-mB-),galdcmDE3pLysSCamr

4JM109菌株

该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株

基因型:recA1endA1gyrA96thi1hsdR17supE44relA1ΔlacproAB/F’

5TOP10菌株

该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

基因型:F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15lac74recA1araΔ139Δ(ara-leu)7697galUgalKrps(Strr)endA1nupG

6HB101菌株

该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验

基因型:supE44hsdS20rB-mB-),recA13ara14proA2lacY1galK2rpsL20xyl-5mtl-1leuB6thi-1M110SCS110

大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响.部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如FbaIMboI等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如XbaI,BclI等。而且甲基化只发生在特定序列,以XbaI为例,只有在位点序列旁出现GATC,该XbaI位才会被甲基化。而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:

1)选用上述酶的同功酶,如Sau3AIDNA识别切割位点与MboI相同;但不受甲基化影响;

2)利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备,如E.coliJM110和链霉菌等,前者DamDcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。




1条评论

liliuyun;
大肠杆菌种类挺多的,学习了
2022-06-14 08:01:06;

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