根据GenBank上已公布的空肠弯曲菌NCTC11168全基因组序列，以及质粒pRY107图谱，应用软件Primer5.0设计引物。引物fliD-F/R用于扩增空肠弯曲菌fliD基因，引物kanr-F/R用于扩增质粒pRY107中卡那霉素抗性基因盒。将fliD基因及kanr抗性基因与pMD-20T载体连接，并转化DH5α感受态细胞。AflⅡ为fliD基因内部单一酶切位点，而且在pMD-20T载体中无此酶切位点。通过酶切连接反应，将pMD20T-kanr载体中的kanr插入pMD20T-fliD载体中fliD基因内部，从而完成自杀载体构建。
参考文献：唐虹, 张小燕, 杜雪晴, 宋召军, 焦新安, 黄金林. 空肠弯曲菌fliD基因突变株的构建及其生物学特性[J]. 微生物学报, 2018, 58(2): 219-227.
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空肠弯曲菌fliD基因突变株的构建
根据GenBank上已公布的空肠弯曲菌NCTC11168全基因组序列，以及质粒pRY107图谱，应用软件Primer5.0设计引物。引物fliD-F/R用于扩增空肠弯曲菌fliD基因，引物kanr-F/R用于扩增质粒pRY107中卡那霉素抗性基因盒。将fliD基因及kanr抗性基因与pMD-20T载体连接，并转化DH5α感受态细胞。AflⅡ为fliD基因内部单一酶切位点，而且在pMD-20T载体中无此酶切位点。通过酶切连接反应，将pMD20T-kanr载体中的kanr插入pMD20T-fliD载体中fliD基因内部，从而完成自杀载体构建。
参考文献：唐虹, 张小燕, 杜雪晴, 宋召军, 焦新安, 黄金林. 空肠弯曲菌fliD基因突变株的构建及其生物学特性[J]. 微生物学报, 2018, 58(2): 219-227.
