苯酚/氯仿作为蛋白变性剂，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态，真核细胞DNA的分离通常是在EDTA及SDS一类去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞获得。

1.实验操作步骤

（1）1ml菌体发酵液，离心10min，去上清液；

（2）加500uLTE悬浮沉淀，并加10-20uLLysozyme混匀，37度保温0.5h；

（3）加30uL10%SDS，3uL20ug/ml（或1mg干粉）蛋白酶K，混匀，37度保温1h；

4）加100ul5mol/LNaCl混匀；

（5）加8ulCTAB/NaCl溶液，混匀，65度保温10min；

（6）用等体积酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）抽提，离心5min，将上清液移至干净离心管中；

（7）用等体积氯仿：异戊醇（24：1）抽提，离心5min，取上清液移至干净离心管中；

（8）加等体积异丙醇，颠倒混合，-20度静止20min，沉淀DNA，离心5min；

（9）倒出上清液，DNA沉淀用70%乙醇漂洗后，吸干，溶解于50uLTE；

（10）最后贮存液中加入1uLRNase。

2.实验结果

通常可获得3-5ugDNA。