1)      PBS调节菌液OD600=1.0，以1：100比例转接至5 ml新鲜TSB培养基，充分混合；

2)      在超净台中无菌操作，将新转接的菌液以150 μl/孔的体积分装入无菌的96孔细胞培养板（聚苯乙烯），每个样品设6个重复，并设置TSB阴性对照，28℃静置培养。

3)      培养72 h后打开96孔板盖，吸弃培养基，灭菌的PBS清洗培养孔4-5次，以去除残留菌液，37℃放置干燥；

4)      每孔用200 μl包音氏固定液固定1 h，灭菌的PBS轻轻清洗培养孔4-5次，37℃放置干燥；

5)      每孔加入200 μl的1%结晶紫染液，染色0.5 h，之后用蒸馏水冲洗5-6次，37℃放置干燥；

6)      待干燥后，加入200 μl的95%乙醇溶解，酶标仪检测595 nm波长（结晶紫最大吸收波长）的光吸收值。