利用引物从大肠杆菌MG1655基因组中扩增出aldH基因，然后克隆到pGEM-T easy中，将dhaB-gdrA 和 gdrB片段克隆到pCDFDuet-1的相同酶切位点，生成pCDFDuet-1/dhaB-gdrAB。此外，将在pGEM-T easy上携带aldH的BamHI-HindIII片段克隆到pTrc99A表达载体。扩增出四环素抗性基因和zwf、tpiA和yqhD上游和下游的同源区域，构建缺失载体，然后用P1噬菌体转导，获得敲除菌株。最后，将质粒pTrc99A/aldH和pCDFDuet-1/dhaB-gdrAB导入MG1655（DE3）和敲除菌株中。
参考文献：Tokuyama, K., Ohno, S., Yoshikawa, K. et al. Increased 3-hydroxypropionic acid production from glycerol, by modification of central metabolism in Escherichia coli . Microb Cell Fact 13, 64 (2014).
技术服务 Technology Services
联系我们
CONTACT US
-
0574-87917803
服务热线 -
testobio@163.com
邮箱
利用引物从大肠杆菌MG1655基因组中扩增出aldH基因，然后克隆到pGEM-T easy中，将dhaB-gdrA 和 gdrB片段克隆到pCDFDuet-1的相同酶切位点，生成pCDFDuet-1/dhaB-gdrAB。此外，将在pGEM-T easy上携带aldH的BamHI-HindIII片段克隆到pTrc99A表达载体。扩增出四环素抗性基因和zwf、tpiA和yqhD上游和下游的同源区域，构建缺失载体，然后用P1噬菌体转导，获得敲除菌株。最后，将质粒pTrc99A/aldH和pCDFDuet-1/dhaB-gdrAB导入MG1655（DE3）和敲除菌株中。
参考文献：Tokuyama, K., Ohno, S., Yoshikawa, K. et al. Increased 3-hydroxypropionic acid production from glycerol, by modification of central metabolism in Escherichia coli . Microb Cell Fact 13, 64 (2014).
