问题1：切片组织一直破碎怎么办？

有可能是组织脱水未完全，在冰冻切片时含有冰晶。切片时就会容易破碎。也有可能是冰冻切片机温度设置过低，而切片厚度又较厚就容易出现样本破碎。

问题2：双重染色时不同抗体添加顺序？

由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。应注意两种一抗在混合稀释时，抗体的终浓度应为每一种抗体的工作浓度。

问题3：做间接法免疫荧光染色，如何设置对照？

最好是同一视野在未用荧光激发下进行对照，看是否非特异性染色。

（1）空白对照：如果你做的是石蜡切片免疫组化，这个对照必须有，目的是看自发荧光，脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。

（2）阴性对照：标本直接滴加二抗，呈阴性反应。

（3）抗原对照：标本加同种动物的未免疫血清，以PBS冲洗后，在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体，应呈阴性反应。