开发了一个新的大肠杆菌菌株，名为FR13，携带假单胞菌基因编码铁酰辅酶a合成酶和铁酰辅酶a水合酶/醛缩酶集成到染色体，我们可以应用环境条件（特别是pH）不利于大肠杆菌生长细胞，但有利于底物进入细胞，提高Fcs的催化活性，抑制内源性酶负责香兰素还原为香草醇。为了构建该质粒，用HindIII和SstI切割pBB1，从荧光假单胞菌BF13中提取一个包含启动子区（Pfer）和编码阿魏酰辅酶a合成酶（fcs）和烯酰辅酶a水合酶/醛缩酶（ech）基因的DNA片段。将该片段亚克隆到pPR9TT的相应位点，获得pFF0。然后，用EcoRI将pFF0线性化，并与包含整个lacZ基因和rrnBT1T2转录终止子的EcoRI片段连接，构建pFR1。最后，从pFR1中获得一个包含处于Pfer启动子控制下ech和fcs基因和lacZ的3端的SstI片段，亚克隆到pLOI2227的相应位点，得到pFR2。
参考文献：Luziatelli F, Brunetti L, Ficca AG, Ruzzi M. Maximizing the Efficiency of Vanillin Production by Biocatalyst Enhancement and Process Optimization. Front Bioeng Biotechnol. 2019 Oct 18;7:279.
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开发了一个新的大肠杆菌菌株，名为FR13，携带假单胞菌基因编码铁酰辅酶a合成酶和铁酰辅酶a水合酶/醛缩酶集成到染色体，我们可以应用环境条件（特别是pH）不利于大肠杆菌生长细胞，但有利于底物进入细胞，提高Fcs的催化活性，抑制内源性酶负责香兰素还原为香草醇。为了构建该质粒，用HindIII和SstI切割pBB1，从荧光假单胞菌BF13中提取一个包含启动子区（Pfer）和编码阿魏酰辅酶a合成酶（fcs）和烯酰辅酶a水合酶/醛缩酶（ech）基因的DNA片段。将该片段亚克隆到pPR9TT的相应位点，获得pFF0。然后，用EcoRI将pFF0线性化，并与包含整个lacZ基因和rrnBT1T2转录终止子的EcoRI片段连接，构建pFR1。最后，从pFR1中获得一个包含处于Pfer启动子控制下ech和fcs基因和lacZ的3端的SstI片段，亚克隆到pLOI2227的相应位点，得到pFR2。
参考文献：Luziatelli F, Brunetti L, Ficca AG, Ruzzi M. Maximizing the Efficiency of Vanillin Production by Biocatalyst Enhancement and Process Optimization. Front Bioeng Biotechnol. 2019 Oct 18;7:279.
