采用标准方法构建了两个含有氨苄西林和四环素抗性基因作为可选择标记的新质粒。将包含丙酮酸脱羧酶、醇氢化酶的乙醇生产启动子和一个从pLOI308-10中去除一个5.2千碱基的EcoRI片段转录终止子，插入pBR322的EcoRl位点，生成pLOI308-11。将含有四环素抗性基因的来自pCOS 2EMBL的2.6千碱基EcoRI片段插入pLOI295 的Sall位点，构建质粒pLOI297。在结合前，用E.的Klenow片段DNA聚合酶处理，去除粘附的末端。利用氯化钙法进行转化，将质粒引入不同菌株的大肠杆菌。
参考文献：Alterthum F, Ingram LO. Efficient ethanol production from glucose, lactose, and xylose by recombinant Escherichia coli. Appl Environ Microbiol. 1989 Aug;55(8):1943-8.
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采用标准方法构建了两个含有氨苄西林和四环素抗性基因作为可选择标记的新质粒。将包含丙酮酸脱羧酶、醇氢化酶的乙醇生产启动子和一个从pLOI308-10中去除一个5.2千碱基的EcoRI片段转录终止子，插入pBR322的EcoRl位点，生成pLOI308-11。将含有四环素抗性基因的来自pCOS 2EMBL的2.6千碱基EcoRI片段插入pLOI295 的Sall位点，构建质粒pLOI297。在结合前，用E.的Klenow片段DNA聚合酶处理，去除粘附的末端。利用氯化钙法进行转化，将质粒引入不同菌株的大肠杆菌。
参考文献：Alterthum F, Ingram LO. Efficient ethanol production from glucose, lactose, and xylose by recombinant Escherichia coli. Appl Environ Microbiol. 1989 Aug;55(8):1943-8.
