使用酿酒酵母基因组作为模板和引物组Sam2-F和Sam2-R扩增Sam2。将PCR产物纯化并用EcoR I和BamH I消化，然后连接到EcoRI-BamHI消化的质粒pPIC9K中，得到质粒pPIC9K-Sam2。经Bgl II线性化后，质粒pPIC9K-Sam2通过电穿孔法转化到巴斯德毕赤酵母GS115中，用引物将CBS基因从毕赤酵母GS115中扩增出来，将片段亚克隆到质粒pMD19T中得到质粒pMD19T-CBS，用引物从pPICZα质粒中扩增出博莱霉素基因，扩增后的产物用Spe I消化，然后克隆到pMD19T-CBS的Spe I位点，得到pMD19T-C-Z质粒。
参考文献：Yu P, Shen X. Enhancing the production of S-adenosyl-L-methionine in Pichia pastoris GS115 by metabolic engineering. AMB Express. 2012 Oct 30;2(1):57.
技术服务 Technology Services
联系我们
CONTACT US
-
0574-87917803
服务热线 -
testobio@163.com
邮箱
使用酿酒酵母基因组作为模板和引物组Sam2-F和Sam2-R扩增Sam2。将PCR产物纯化并用EcoR I和BamH I消化，然后连接到EcoRI-BamHI消化的质粒pPIC9K中，得到质粒pPIC9K-Sam2。经Bgl II线性化后，质粒pPIC9K-Sam2通过电穿孔法转化到巴斯德毕赤酵母GS115中，用引物将CBS基因从毕赤酵母GS115中扩增出来，将片段亚克隆到质粒pMD19T中得到质粒pMD19T-CBS，用引物从pPICZα质粒中扩增出博莱霉素基因，扩增后的产物用Spe I消化，然后克隆到pMD19T-CBS的Spe I位点，得到pMD19T-C-Z质粒。
参考文献：Yu P, Shen X. Enhancing the production of S-adenosyl-L-methionine in Pichia pastoris GS115 by metabolic engineering. AMB Express. 2012 Oct 30;2(1):57.
