编码L.细菌cpf1的Lb_cpf1基因经过密码子优化，可在构巢曲霉中翻译，并由GeneArt™合成。通过将Lb_cpf1基因与构巢曲霉tef1启动子和终止子融合，然后整合到USER消化的pAC572骨架中，创建了编码Lb_cpf1基因的USER兼容骨架。将tef1启动子与消化的骨架融合的Te引物包括一个新的USER限制性位点。新创建的Cpf1 CRISPR USER兼容骨架（pAC1430）在随后的实验中用于创建编码gRNA表达盒的载体。gRNA盒是使用两种具有USER粘性末端的PCR产物构建的，即U3p-tRNA重复序列和原空间tRNA-U3t。使用载体pFC902扩增PCR产物。
参考文献：Vanegas KG, Jarczynska ZD, Strucko T, Mortensen UH. Cpf1 enables fast and efficient genome editing in Aspergilli. Fungal Biol Biotechnol. 2019 May 1;6:6.
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编码L.细菌cpf1的Lb_cpf1基因经过密码子优化，可在构巢曲霉中翻译，并由GeneArt™合成。通过将Lb_cpf1基因与构巢曲霉tef1启动子和终止子融合，然后整合到USER消化的pAC572骨架中，创建了编码Lb_cpf1基因的USER兼容骨架。将tef1启动子与消化的骨架融合的Te引物包括一个新的USER限制性位点。新创建的Cpf1 CRISPR USER兼容骨架（pAC1430）在随后的实验中用于创建编码gRNA表达盒的载体。gRNA盒是使用两种具有USER粘性末端的PCR产物构建的，即U3p-tRNA重复序列和原空间tRNA-U3t。使用载体pFC902扩增PCR产物。
参考文献：Vanegas KG, Jarczynska ZD, Strucko T, Mortensen UH. Cpf1 enables fast and efficient genome editing in Aspergilli. Fungal Biol Biotechnol. 2019 May 1;6:6.
