为了积累l-丝氨酸，依次删除编码l-丝氨酸脱氢酶的sdaA、编码异柠檬酸裂解酶调节因子的iclR和编码有氧呼吸控制蛋白的arcA，敲除编码苹果酸合酶的aceB，然后将过表达serAFR、serB和serC基因的质粒转化为工程菌株。编码3-磷酸甘油酸脱氢酶的serAFR基因通过删除野生SerA的最后四个C末端残基来解除对l-丝氨酸的反馈抑制。质粒pBBR1MCS-2和pTrc99a用于过表达serAFR、serB和serC。将serAFR的质粒pKJ-1用作模板，通过寡核苷酸serA-F/serA-R扩增serAFR。分别使用引物serB-F/serB-R和serC-F/serC R从野生大肠杆菌DH5α的染色体DNA中扩增出serB和serC基因。然后将三种PCR产物分别用XhoI、HindIII和EcoRV单酶切，并用T4连接酶依次连接到克隆载体pBBR1MCS-2中，以获得pYF-2。为了构建质粒pYF-1，以serABC-F/serABC-R为引物扩增了pYF-2中含有serAFR serB serC基因的DNA片段。然后用SacI单次消化PCR产物，并将其连接到载体pTrc99a中。
参考文献：Gu P, Yang F, Su T, Li F, Li Y, Qi Q. Construction of an L-serine producing Escherichia coli via metabolic engineering. J Ind Microbiol Biotechnol. 2014 Sep;41(9):1443-50.
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为了积累l-丝氨酸，依次删除编码l-丝氨酸脱氢酶的sdaA、编码异柠檬酸裂解酶调节因子的iclR和编码有氧呼吸控制蛋白的arcA，敲除编码苹果酸合酶的aceB，然后将过表达serAFR、serB和serC基因的质粒转化为工程菌株。编码3-磷酸甘油酸脱氢酶的serAFR基因通过删除野生SerA的最后四个C末端残基来解除对l-丝氨酸的反馈抑制。质粒pBBR1MCS-2和pTrc99a用于过表达serAFR、serB和serC。将serAFR的质粒pKJ-1用作模板，通过寡核苷酸serA-F/serA-R扩增serAFR。分别使用引物serB-F/serB-R和serC-F/serC R从野生大肠杆菌DH5α的染色体DNA中扩增出serB和serC基因。然后将三种PCR产物分别用XhoI、HindIII和EcoRV单酶切，并用T4连接酶依次连接到克隆载体pBBR1MCS-2中，以获得pYF-2。为了构建质粒pYF-1，以serABC-F/serABC-R为引物扩增了pYF-2中含有serAFR serB serC基因的DNA片段。然后用SacI单次消化PCR产物，并将其连接到载体pTrc99a中。
参考文献：Gu P, Yang F, Su T, Li F, Li Y, Qi Q. Construction of an L-serine producing Escherichia coli via metabolic engineering. J Ind Microbiol Biotechnol. 2014 Sep;41(9):1443-50.
