在微生物实验操作中，环境的无菌度对实验结果以及实验的有效性有决定性的影响。所以对于微生物工作者来说，无菌室的消毒灭菌是一项非常重要的工作。下面将常用的无菌室消毒灭菌方法进行汇总：

1、紫外线消毒：

在室温20℃～25℃时220V，30W紫外灯下方垂直位置1.0m处，253.7nm紫外线辐射强度应≥70μW/cm2 ，低于此值时应更换。适当数量的紫外灯，确保平均每立方米应不少于1.5W。

紫外线消毒时，无菌室内应保持清洁干燥。

在无人条件下，可采取紫外线消毒，作用时间应≥30min。室内温度＜20℃或＞40℃、相对湿度大于60%时，应适当延长照射时间到足够的照射剂量。

  人员在关闭紫外灯至少30min后方可入内作业。

2.消毒剂喷洒：

用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液（常用消毒剂的品种有：5-20倍稀释的碘伏水溶液、0.1%新洁尔灭溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（来苏儿）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液（处方：对羟基苯甲酸甲酯21.5g；对羟基苯甲酸丙酯8.6g，75%乙醇10ml）等，所用的消毒剂品种与使用要进行有效性验证方可使用，并定期更换消毒剂的品种）擦拭操作台及可能污染的死角。

方法是用无菌纱布浸渍消毒溶液清洁超净台的整个内表面、顶面、及无菌室、人流、物流、缓冲间的地板、传递窗、门把手。清洁消毒程序应从内向外，从高洁净区到低洁净区。逐步向外退出洁净区域。然后开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1-2h，以杀灭存留微生物。在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌30min。

3、熏蒸：

3.1甲醛熏蒸

按照甲醛（40%）10毫升／立方米、高锰酸钾5克／立方米计算用量。不同情况下，用量有所不同，但比例为2：1。盛药容器要大、耐热、耐腐蚀；一般用陶瓷或玻璃容器，因为高锰酸钾和甲醛都具有腐蚀性，且混合后反应剧烈，释放热量，是将甲醛倒入高锰酸钾溶液内。

  房间要密闭：这样熏蒸效果才会好。容器应尽量靠近门，以便操作人员迅速撤离；先将温水倒入容器内，后加入高锰酸钾，搅拌均匀；再加入甲醛；加入甲醛后人立即离开，密闭房间。消毒时间一般为20-30分钟，消毒后要打开门窗通风换气。

3.2乳酸熏蒸

按照蒸馏水：乳酸为1:1的比例配置乳酸溶液，1-2mL/m3，熏蒸2小时，密闭门窗12h。对器物腐蚀性较强。

4、臭氧发生器

臭氧是世界公认的广谱高效杀菌消毒剂。采用空气或氧气为原料利用高频高压放电产生臭氧。臭氧比氧分子多了一活泼的氧原子臭氧，化学性质特别活泼，是一种强氧化剂，在一定浓度下可迅速杀灭空气中的细菌。没有任何有毒残留，不会形成二次污染，被誉为“最清洁的氧化剂和消毒剂”。

用臭氧对物体表面消毒，由于作用缓慢，其浓度应≥60mg/m3，相对湿度≥70%,作用时间60min-120min。