成团泛菌原属于肠杆菌属，现归于泛菌属（Pantoea）。成团泛菌产气株与阴沟肠杆菌菌落相似；而非产气株菌落有以下几种不同的菌落形态：粗糙、皱褶，接种环难于刮取；光滑、圆形、边缘不规则；“花椰菜”状粗糙；凸起的黏液型菌落，特别是在含糖的培养基上。75%～85%的不产气株产黄色素，尤其在25～30℃易于产生色素。该色素类似胡萝卜素，溶于乙醇和丙酮，不溶于水和氯仿；产气株产色素者小于5%。成团泛菌常在植物的花、种子和其他蔬菜中检出，也存在于水、土壤、饲料和粮食中，为腐生菌。该菌是免疫力低下患者的机会致病菌，可引起早产儿和新生儿感染、烧伤、多发性创伤、白血病及应用免疫抑制剂患者...

答：①细菌总DNA抽提：将细菌接种在LB液体培养基中，35℃摇床过夜。取1.5ml菌液倒入Eppendorf管中，12 000r/min离心5分钟，弃上清液，用100μl裂解液（内含25μg溶菌酶）将细菌重悬，混匀，37℃孵育30分钟，100℃水浴2分钟后，加入等体积的Tris2饱和重蒸酚和氯仿，混匀，12 000r/min离心5分钟后，收集水相备用。②PCR反应条件：95℃预变性5分钟，94℃ 1分钟，56℃ 1分钟，74℃1分钟，共35个循环，延伸5分钟，扩增产物加入2%的琼脂糖凝胶，在80mV电压下电泳2小时，然后在透射紫外仪下照相观察。

目前，16S rRNA基因的广范围引物序列已经公开（下表）。由于细菌16S rRNA基因的前500bp的变异较大，包含了丰富的种属信息，CLSI MM18-A建议采用4f-534r与27f-801r的引物组合进行PCR扩增和测序分析。但在一些科研究论文中，尤其是发表细菌新种的论文中，通常采用27f-1492r 或27f-1525r的引物组合进行广范围PCR扩增和测序。细菌16S rRNA基因的PCR扩增参数基本如下：94℃ 5分钟；94℃ 1分钟，50～55℃ 1分钟，72℃ 1分钟，35个循环；72℃ 7分钟；4℃保温。

可采集患者的血液、骨髓、乳汁、子宫分泌物、脓性分泌物、脑膜炎患者的脑脊液等作细菌培养。骨髓培养的阳性率高于血培养。由于该菌生长缓慢，血培养需要长时间培养和盲目传代，有时需2周左右方可获阳性结果，需1个月才可出阴性报告。 

典型菌落可进行氧化酶试验，如果氧化酶阳性，鉴定时用百日咳博德特菌抗血清进行凝集反应，如果氧化酶阴性，鉴定时用副百日咳博德特菌抗血清进行凝集反应。抗血清试验有明确结果时，不需附加其他试验进行鉴定。如结果不确定，则需采用其他的鉴定方法（下表）。注：+，阳性结果；−，阴性结果；V，不同结果，N，无资料。a37℃；b25℃明显；c4h阳性

博德特菌属为严格的需氧菌，营养要求很高，尤其是百日咳博德特菌和副百日咳博德特菌，初次分离培养需用含甘油、马铃薯、血液的鲍-金（Bordet-Gengou，BG）培养基，但在CHB琼脂（添加10%去纤维马血的木炭琼脂基质）平板上生长更好。最佳培养温度为35～36℃，要有足够的湿度，培养时不需添加二氧化碳。博德特菌属细菌生长缓慢，培养3～5天后，在CHB琼脂培养基上的典型菌落为小、光滑、隆起（似汞滴）、有特征性的珠光色泽（或称无烟煤色）、乳酪样黏稠的菌落，菌落陈旧时色泽由灰白到褐绿色。菌落周围有不明显的溶血环。阴性结果通常要培养到7天，但有报道延长培养时间至12天能增加18...