荧光蛋白标记技术蛋白标记的主要目的是监测生物过程、辅助检测（例如化合物的可靠定量、蛋白质修饰的特异性检测）或者纯化标记后的蛋白及其结合对象。蛋白质的标记能够提高检测灵敏度以及简化检测工作流程。目前有多种蛋白质标记技术来帮助我们研究感兴趣的蛋白质的丰度、位置、相互作用、翻译后修饰、功能，乃至监测活细胞中的蛋白质运输等问题。目前有多种类型的标记物和标记方式可供选择，但是针对特定的应用应当选择适合的标记策略。no.1代谢标记策略代谢标记策略是一种体内标记方法，在这种方法中，细胞被“喂养”了化学标记的营养物，然后这些标记物被掺入新合成的蛋白质、核酸或代谢物中。然后，我们可以收集...

以GFP为蓝本通过基因技术合成的突变体发射光谱涵盖了整个可见光波段，近几年针对荧光蛋白的改造工作主要集中于提高荧光蛋白的亮度，改变Stokes位移(指激发峰与发射峰之间的距离)和光谱特性，以及寻找新型光转换/光激活荧光蛋白等方面开展。下面介绍几种较为常用的绿色/红色荧光蛋白基因及发光特性。mGFP5：将野生型GFP的ser65替换为thr，荧光强度较野生型的GFP提高了4-6倍。GFP的激发光波长与紫外线区较为接近，对光学要求较高，并且对生物有较大的毒害作用，不适宜作活细胞观察。改造后的mGFP5的激发光波长提高到488nm，位于青色区域，有效避免了上述缺点。目前这一突...

个体计数法：（1）直接法：血球计数法、涂片染色法  （2）间接法：平板菌落数法、薄膜过滤计数法、比浊法重量法生理指标法   

厌氧培养基中通常都有氧气指示剂（刃天青钠），在有氧的时候为红色，无氧时为无色。培养基除氧一般采用通入氮气或二氧化碳驱除培养基中的氧气，同时配合还原剂（L-半胱氨酸盐）除去残留的氧气。

一、操作步骤：      1. 从-80℃冰箱中取出对应的感受态细胞，室温下置于冰盒上解冻，标记;       2. 向感受态细胞中加入2µl的质粒，置于4℃冰箱中,冰浴30min;       3. 在42℃水浴锅中热激1min，然后立即在冰盒上放置2min；       4. 每管加900µl  LB培养基，37℃摇床震荡,150rpm×45min；      &nbs...

密码子优化是通过基因工程技术，根据宿主的密码子偏好性调整基因的同义密码子，达到消除稀有密码子的目的，并且优化如mRNA二级结构和Motif等相关参数，从而提高翻译效率。当异源基因在宿主中无法有效表达时，可以考虑进行密码子优化，调整同义密码子和相关的调控元件，提高翻译效率。通过这种方法提高异源基因翻译效率的报道已经很多。