涂布棒在酒精蘸一下，然后烧一下，能不能保证把所用的菌烧死？参考见解：涂布棒可以在酒精中保藏，但是酒精不能即时杀菌。蘸了酒精后再烧一小会，烧的是酒精而不是涂布棒。建议涂布棒还是干烧较长时间后，冷却了再涂。同时作多个转化时，应用几个涂布棒免得交叉污染。原先测序鉴定没有问题的细菌，37℃摇菌后发现质粒大小或序列出现异常?参考见解：这种情况出现的几率较小，常出现在较大质粒或比较特殊的序列中。解决办法：1、降低培养温度，在20～25℃下培养，或室温培养可明显减少发生概率。2、使用一些特殊菌株，如Sure菌株，它缺失了一些重组酶，如rec类等，使得质粒复制更加稳定。3、质粒抽提有一...
质粒DNA的小量制备⑴将2ml含Amp抗生素的LB培养基加入到容量为10ml并通气良好的大试管中，然后接入一单菌落，37℃剧烈振摇，培养过夜；⑵将1.5ml培养物倒入eppendorf管中，用微量离心机与4℃，12，000g离心30sec，将剩余培养物贮存于4℃；⑶倒出培养液，尽可能清除残余液；⑷将细菌沉淀重悬于100ul冰预冷的溶液Ⅰ中，剧烈振荡，使细菌沉淀再溶液Ⅰ中完全分散。溶液Ⅰ：50mmol/L葡萄糖，25mmol/Ltris－Cl(pH8.0),10mmol/L EDTA(pH8.0)⑸加入200ul新配置的溶液Ⅱ，盖紧管口，快速颠倒离心管数次，混匀内容物，将...
革兰氏阴性菌，如E.coli，一般有三种可以选择的方法。一、水煮模板法——主要用于PCR反应 1、接种单菌落于LB或脑心平板，连续画线，37摄氏度培养18－24小时。 2、刮取1～2接种环菌苔加入150微升三蒸水中，混匀，100摄氏度煮沸10分钟。 3、12000转/分钟 离心10分钟，取上清，－20摄氏度保存备用。 操作最简便，对试剂条件要求低。缺点是纯度不够高，可能会含有RNA、蛋白等杂质。但是作为一般检测目...
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