肺炎链球菌鉴定主要根据菌落形态（自溶现象、脐窝状菌落、宽大草绿色溶血环）、革兰染色特征（革兰阳性球菌、矛头状成对排列）及奥普托辛（Optochin）敏感、胆汁溶解阳性和菊糖阳性进行。
黏滑口腔球菌原归为口腔球菌属，现归为微球菌科，罗氏菌属（Rothia），现更名为黏滑罗氏菌。黏滑罗氏菌一般直径为0.9～1.3µm，革兰阳性球菌，较葡萄球菌稍大，多呈葡萄状排列，也可成对或四联排列，无鞭毛、无芽胞。有荚膜。
孪生球菌革兰染色时确实易脱色形成阴性或阴阳不定，显微镜下菌体呈肾形或卵圆形，大小为0.5μm ×（0.5～1.4）μm，多成对排列，也可四联状或短链状排列，其中溶血孪生球菌多成对、四联状或成簇排列，其他孪生球菌成对或短链排列。
黏滑罗氏菌菌落为胶样，紧紧黏附在琼脂表面，不易被接种环刮起，在血平板上无溶血；触酶弱阳性或阴性，氧化酶和凝固酶阴性，对杆菌肽、呋喃唑酮、新生霉素敏感，对溶葡萄球菌酶和多黏菌素B耐药。
孪生球菌与其他触酶阴性或弱阳性革兰阳性球菌鉴别要点见下表。 a化脓链球菌和某些肺炎链球菌PYR可阳性；b草绿色链球菌群和D群链球菌阴性，B群链球菌阳性；c除耐万古霉素肠球菌（VRE）外，大部分临床分离菌株敏感。v.反应不定；+.阳性；−.阴性；S.敏感；R.耐药
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