产品描述
本产品为团队精心优化的间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒，可增强间充质干细胞向成骨细胞分化的能力。
本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。
产品组成成分及保存
试剂名称 | 体积（100mL规格/200mL规格） | 保存条件及有效期 |
诱导分化添加剂 | 5mL / 10mL | -20℃，1 Year |
优质胎牛血清 | 10mL / 20mL | -20℃，1 Year |
细胞基础培养基 | 85mL / 170mL | 4℃，1 Year |
茜素红染色液 | 5mL / 10mL | RT（室温），1 Year |
注意：1.为保证产品的有效性，请避免反复冻融。
2. 配制好的诱导培养基保存于2-8℃，有效期为2周，请根据实验用量合理配制。
产品使用说明
1. 间充质干细胞成骨诱导分化完全培养基的配制
① 室温条件下融化添加剂及血清。（注意：若添加剂或血清中有沉淀物，属正常现象，无须过滤，避免成分丢失。）
② 根据实验用量，于无菌操作台中配制完全培养基，建议每次配制50mL，先加细胞基础培养基和胎牛血清，再加诱导分化添加剂。
配制比例 | 50mL配制体系 | |
诱导分化添加剂 | 5% | 2.5mL |
优质胎牛血清 | 10% | 5mL |
细胞基础培养基 | 85% | 42.5mL |
表一
2. 间充质干细胞成骨诱导分化实验步骤
①包被细胞培养瓶/板：向细胞培养器皿中加入0.1%明胶溶液，轻微晃动，使包被液完全覆盖培养器皿底面，置于37℃培养箱中孵育30min，吸除液体即可使用。
②建议取第3~5代、纯度达90%以上、状态良好的间充质干细胞，将其消化收集，使用含10%FBS的完全培养基调整细胞浓度，均匀铺于包被好的培养瓶/板中，置于37℃，5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。
培养器皿 | 底面积 | 细胞量 | 培养液体积 |
24孔培养板 | 2cm/孔 | 2×105cell/孔 | 1mL/孔 |
12孔培养板 | 4.5cm/孔 | 4.5×105cell/孔 | 2mL/孔 |
6孔培养板 | 9.6cm/孔 | 9.6×105cell/孔 | 2mL/孔 |
T25培养瓶 | 25cm | 25×105cell | 5mL |
6cm培养皿 | 21cm | 21×105cell | 5mL |
10cm培养皿 | 55cm | 55×105cell | 10mL |
表二
③待细胞汇合度达约90%时，即可进行诱导分化。
④小心吸弃细胞培养上清，沿孔壁缓慢加入提前配制好的诱导分化完全培养基，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。
（注意：完全培养基加入细胞前需提前置于37℃预热。）
⑤每2~3day换用新鲜的诱导分化完全培养基。换液时，若细胞培养上清颜色变为澄清的黄色，是由于细胞量较大，营养消耗较快导致的，请及时缩短换液周期。
⑥细胞诱导2~4周后，即可进行茜素红染色鉴定。（注意：请在显微镜下确认钙结节形成后，再进行染色鉴定。）
3. 茜素红染色分析
① 细胞诱导分化结束后，小心吸弃细胞培养上清，1×PBS润洗1~2次，室温固定30 min。（细胞固定液为4%中性甲醛溶液等）
② 吸弃细胞固定液，1×PBS润洗2次。沿孔壁缓慢加入茜素红染色液，染液体积请参考表二，室温染色30min。（注意：染色液底部可能会有沉淀，吸取时尽量不要触及底部。若细胞染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）
③ 吸出染色液，1×PBS润洗，去掉浮色。显微镜下观察细胞染色效果，钙盐呈较深的橙红色。
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本产品为团队精心优化的间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒，可增强间充质干细胞向成骨细胞分化的能力。
本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。
产品组成成分及保存
试剂名称 | 体积（100mL规格/200mL规格） | 保存条件及有效期 |
诱导分化添加剂 | 5mL / 10mL | -20℃，1 Year |
优质胎牛血清 | 10mL / 20mL | -20℃，1 Year |
细胞基础培养基 | 85mL / 170mL | 4℃，1 Year |
茜素红染色液 | 5mL / 10mL | RT（室温），1 Year |
注意：1.为保证产品的有效性，请避免反复冻融。
2. 配制好的诱导培养基保存于2-8℃，有效期为2周，请根据实验用量合理配制。
产品使用说明
1. 间充质干细胞成骨诱导分化完全培养基的配制
① 室温条件下融化添加剂及血清。（注意：若添加剂或血清中有沉淀物，属正常现象，无须过滤，避免成分丢失。）
② 根据实验用量，于无菌操作台中配制完全培养基，建议每次配制50mL，先加细胞基础培养基和胎牛血清，再加诱导分化添加剂。
配制比例 | 50mL配制体系 | |
诱导分化添加剂 | 5% | 2.5mL |
优质胎牛血清 | 10% | 5mL |
细胞基础培养基 | 85% | 42.5mL |
表一
2. 间充质干细胞成骨诱导分化实验步骤
①包被细胞培养瓶/板：向细胞培养器皿中加入0.1%明胶溶液，轻微晃动，使包被液完全覆盖培养器皿底面，置于37℃培养箱中孵育30min，吸除液体即可使用。
②建议取第3~5代、纯度达90%以上、状态良好的间充质干细胞，将其消化收集，使用含10%FBS的完全培养基调整细胞浓度，均匀铺于包被好的培养瓶/板中，置于37℃，5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。
培养器皿 | 底面积 | 细胞量 | 培养液体积 |
24孔培养板 | 2cm/孔 | 2×105cell/孔 | 1mL/孔 |
12孔培养板 | 4.5cm/孔 | 4.5×105cell/孔 | 2mL/孔 |
6孔培养板 | 9.6cm/孔 | 9.6×105cell/孔 | 2mL/孔 |
T25培养瓶 | 25cm | 25×105cell | 5mL |
6cm培养皿 | 21cm | 21×105cell | 5mL |
10cm培养皿 | 55cm | 55×105cell | 10mL |
表二
③待细胞汇合度达约90%时，即可进行诱导分化。
④小心吸弃细胞培养上清，沿孔壁缓慢加入提前配制好的诱导分化完全培养基，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。
（注意：完全培养基加入细胞前需提前置于37℃预热。）
⑤每2~3day换用新鲜的诱导分化完全培养基。换液时，若细胞培养上清颜色变为澄清的黄色，是由于细胞量较大，营养消耗较快导致的，请及时缩短换液周期。
⑥细胞诱导2~4周后，即可进行茜素红染色鉴定。（注意：请在显微镜下确认钙结节形成后，再进行染色鉴定。）
3. 茜素红染色分析
① 细胞诱导分化结束后，小心吸弃细胞培养上清，1×PBS润洗1~2次，室温固定30 min。（细胞固定液为4%中性甲醛溶液等）
② 吸弃细胞固定液，1×PBS润洗2次。沿孔壁缓慢加入茜素红染色液，染液体积请参考表二，室温染色30min。（注意：染色液底部可能会有沉淀，吸取时尽量不要触及底部。若细胞染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）
③ 吸出染色液，1×PBS润洗，去掉浮色。显微镜下观察细胞染色效果，钙盐呈较深的橙红色。
