一、沙门氏菌核酸提取
1. 取沙门氏菌菌液1 ml，10,000 rpm (~11,500×g) 离心1 min，尽量吸净上清；
2. 向菌体沉淀中加入200 μl缓冲液GA，振荡至菌体彻底悬浮；加入4 μl RNA酶A溶液，振荡15 sec，室温放置5 min。
3. 向管中加入20 μl蛋白酶K溶液，混匀。
4. 加入220 μl缓冲液GB，振荡15 sec，70 ℃放置10 min，溶液应变清亮。
5. 加220 μl无水乙醇，充分振荡混匀15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心去除管盖内壁的水珠。
6. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）， 12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8. 向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g) 离心30 sec，倒掉废液，吸附柱CB3放入收集管中。
9. 重复操作步骤8。
10. 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min，倒掉废液。将吸附柱 CB3置于室温放置2-5 min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
11. 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100 μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g) 离心2 min，将溶液收集到离心管中。
12. 用nanodrop定量质检提取的沙门氏菌DNA ，放置-20℃冰箱保存备用 。
二、数字PCR定值
1、反应预混液配置：酶、引物探针和水按照比例混合均匀作为预混液，涡旋混匀，离心10s，分装至8联排PCR管中，每孔8μl，1-4号孔，备用；
2、反应体系配置：样品DNA梯度稀释，将稀释好的DNA加入至步骤1中的1-3号孔中，每孔加2μl，取2μl TE加至4号孔作阴性对照，涡旋混匀，离心10s，将配成的反应液对应加至数字PCR芯片孔中，对应每孔加入15μl油；
3、上机：根据试验设置反应温度与时间
4、下机：对样品DNA进行定值
三、DNA质控品生产
1、DNA分装
根据实验需求，对DNA样品进行分装，每管分装100μl，并贴好对应标签。
