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蛋白生物学技术服务

一、技术原理与实验步骤

将目的基因片段连接至合适的原核表达载体后,转化到菌株内,随后利用菌自身的蛋白表达系统通过温度和诱导剂的控制,诱导其在宿主菌内表达目的蛋白质,将表达样品进行SDS-PAGE 以检测表达蛋白质。原核表达系统是至今为止最为成熟可靠的蛋白表达系统,其优点是实验周期短、成本低、产量高。

二、服务流程

1.依据客户提供的蛋白基因、载体要求,设计克隆方案,构建原核表达载体。可提供6xHis、GST、MBP等携带标签及肠激酶、凝血酶等蛋白酶切除标签蛋白的表达载体,提供多种选择;

2.将构建好的质粒转化到菌株内,优化温度、IPTG浓度等条件诱导蛋白表达,SDS-PAGE验证;

3.对蛋白性质进行分析,选择合适的方法分离纯化蛋白;

4.依据客户要求如蛋白纯度、是否需要带标签、带何种类型的标签、蛋白溶解缓冲液要求,是否冻干等提供最终蛋白产品,附加载体构建报告、SDS-PAGE检测报告、目的基因质粒、重组细菌菌株、重组表达菌株等信息。

三、大肠杆菌表达系统

大肠杆菌蛋白表达系统是目前应用最广泛,也是最经济实惠的蛋白表达系统。E. coli具有遗传背景清楚、细胞增殖快、表达量高、稳定性好和抗污染能力强等特点,适用于多种属蛋白的表达,尤其对小分子蛋白的生产具有极大的优势,但也存在一些问题,如易形成包涵体和含有内毒素等。泰斯拓生物提供从密码子优化到重组蛋白表达/纯化的一站式服务以及内毒素去除等附加服务,以满足不同的定制需求。我们拥有丰富的E. coli 可溶性蛋白表达/纯化及蛋白复性经验,拥有多种E. coli细胞株和表达载体,可为客户提供优质的原核蛋白表达服务。

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